阿拉丁 UltraBio™ Ni-NTA 琼脂糖磁珠 (His tag)

阿拉丁 UltraBio™ Ni-NTA 琼脂糖磁珠是一款基于磁性琼脂糖微球的高性能亲和纯化介质，表面修饰的 Ni-NTA 配体能够特异性地结合带有组氨酸标签的重组蛋白。该产品将磁分离技术的便捷性与 Ni-NTA 亲和纯化的高选择性相结合，特别适合小规模筛选、批量纯化以及自动化工作流程。在蛋白表达与纯化实验中，用户可通过磁力架快速完成结合、洗涤和洗脱步骤，减少传统柱纯化所需的离心和装柱操作，提高实验效率。

产品定位与核心能力

该磁珠面向需要快速获取高纯度 His 标签蛋白的研究场景，核心能力体现在特异性结合、快速磁响应和温和洗脱三个方面。其琼脂糖基质具有亲水性好、非特异性吸附低的特性，有助于保持蛋白活性。Ni-NTA 配体通过螯合镍离子固定于基质表面，对邻近组氨酸残基的蛋白质具有强亲和力，洗脱条件温和，适用于多种表达系统来源的样本。

• 适用于细菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞等表达系统获得的 His 标签蛋白。
• 可在数十分钟内完成从裂解液到纯化产物的流程，缩短实验周期。
• 磁响应迅速，配合常规磁力架即可实现固液分离，无需离心或过滤。
• 支持小体积平行筛选，便于优化表达条件和纯化参数。

结构、模块和工作原理

UltraBio™ 磁珠以琼脂糖为骨架，内部嵌入超顺磁性纳米颗粒，赋予其在外加磁场下快速聚集、撤去磁场后重新分散的能力。表面通过化学修饰固定次氮基三乙酸（NTA）配体，再螯合镍离子（Ni²⁺），形成稳定的 Ni-NTA 复合物。当含有组氨酸标签的蛋白与磁珠孵育时，标签上的咪唑侧链与镍离子发生配位作用，实现特异性捕获。洗涤去除未结合杂蛋白后，通过提高咪唑浓度或降低 pH 值即可竞争性洗脱目标蛋白。

该产品将亲和配基与磁分离载体整合于同一微球，简化了传统柱层析的装柱、上样和收集步骤，尤其适合多批次小规模纯化。

功能特点及使用价值

• 特异性高：Ni-NTA 对连续组氨酸标签具有高亲和力，可有效区分目标蛋白与背景杂蛋白。
• 操作灵活：既可用于手动磁力架操作，也可适配自动化液体处理平台，满足不同通量需求。
• 样本兼容性好：可耐受一定浓度的咪唑、盐和还原剂，适合多种裂解缓冲液体系。
• 可重复使用：在适当再生条件下，磁珠可多次使用，降低长期实验成本。
• 低非特异性吸附：琼脂糖基质亲水性强，减少杂蛋白和核酸的非特异性结合。

适用样本、实验类型和应用场景

该磁珠适用于多种表达系统来源的 His 标签蛋白纯化，包括大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞裂解液。典型应用包括：重组蛋白的小规模快速纯化、表达条件筛选、蛋白相互作用研究中的诱饵蛋白捕获、以及结构生物学研究中的样品制备。此外，也可用于从复杂样本中富集 His 标签蛋白，以便后续进行 SDS-PAGE、Western Blot 或质谱分析。

应用场景	工作流要点
小规模表达筛选	在 96 孔板或离心管中平行处理多个样本，快速评估表达量和可溶性。
常规蛋白纯化	裂解液与磁珠孵育后，磁分离洗涤，咪唑洗脱收集目标蛋白。
自动化纯化	适配自动化工作站，实现高通量、标准化的蛋白纯化流程。
pull-down 实验	利用 His 标签诱饵蛋白捕获相互作用蛋白，磁分离后分析结合组分。

典型工作流程和操作要点

使用前需将磁珠充分重悬，确保微球均匀分散。一般流程包括：缓冲液平衡、样本孵育、磁分离洗涤、洗脱收集。孵育时间可根据样本体积和目标蛋白浓度调整，通常为 30 分钟至 1 小时。洗涤步骤建议使用含低浓度咪唑的缓冲液，以去除非特异性结合蛋白。洗脱时可采用含高浓度咪唑的缓冲液或低 pH 缓冲液，收集洗脱组分后及时中和（若使用低 pH 洗脱）。

• 孵育过程保持轻柔混匀，避免磁珠沉降影响结合效率。
• 磁分离时确保上清液澄清，避免吸取磁珠。
• 洗脱组分建议立即进行后续分析或加入中和缓冲液稳定蛋白。
• 若目标蛋白对咪唑敏感，可选择低 pH 洗脱并快速中和。

配套耗材、附件和软件能力

该产品通常以悬浮液形式提供，可直接使用。配套耗材包括磁力架、离心管、移液器吸头等。对于自动化操作，需确认工作站适配的磁力模块和程序。产品本身不包含软件，但可整合至实验室信息管理系统或电子实验记录本中，记录纯化批次和参数。用户可根据实验规模选择不同规格的磁珠悬浮液，并搭配相应的缓冲液体系。

日常维护、清洁和校准

磁珠应储存于 2-8°C 的缓冲液中，避免冷冻和干燥。长期储存时，确保缓冲液含有防腐剂以防止微生物生长。使用后如需再生，可先用高浓度咪唑溶液剥离镍离子，再用 EDTA 或酸洗去除残留金属，最后重新螯合镍离子。再生次数视使用条件和样本复杂度而定。定期检查磁珠的磁响应性能和结合容量，有助于保证纯化效果。

• 储存缓冲液通常含乙醇或叠氮钠，使用前需用平衡缓冲液充分置换。
• 避免使用强还原剂或高浓度螯合剂长时间处理，以免镍离子脱落。
• 再生过程中注意缓冲液 pH 和离子强度，防止琼脂糖基质损伤。
• 若发现磁珠聚集或结合能力下降，建议更换新批次。

配置选择和使用边界

用户在选择规格时需考虑实验通量、样本体积和目标蛋白量。小规模筛选可选择较小包装，常规纯化可选择较大包装。该磁珠适用于 His 标签蛋白的纯化，但对其他标签蛋白无特异性结合能力。样本中若含有高浓度 EDTA 或其他强螯合剂，可能影响镍离子稳定性，需提前去除或稀释。此外，极端 pH 或高盐条件可能影响结合效率，建议优化缓冲液配方。

常见问题

1. 如何选择适合的磁珠规格？

规格选择主要取决于实验规模和通量。小规模筛选或预实验可选用较小体积的包装，常规纯化或批量处理建议选择较大体积包装。同时需考虑磁珠的结合容量与目标蛋白表达量的匹配，避免磁珠过量或不足。

2. 该磁珠适用于哪些样本类型？

适用于细菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞等表达系统获得的裂解液，也可用于血清、腹水等复杂样本中 His 标签蛋白的富集。对于含有高浓度螯合剂或强还原剂的样本，建议先进行缓冲液置换或稀释。

3. 磁珠可以重复使用吗？如何再生？

在适当条件下可以重复使用。再生通常包括剥离镍离子、去除残留蛋白、重新螯合镍离子等步骤。具体再生次数视样本复杂度和操作条件而定，若发现结合能力下降或非特异性吸附增加，建议更换新磁珠。

4. 洗脱时应该选择咪唑还是低 pH 缓冲液？

两种方式均可。咪唑竞争洗脱较为温和，适合大多数蛋白；低 pH 洗脱效率高，但可能影响某些蛋白的活性，洗脱后需立即中和。用户可根据目标蛋白的稳定性选择合适方式，或先进行小规模测试。

5. 使用磁珠时需要特别注意哪些操作细节？

操作时需保持磁珠充分重悬，避免长时间静置导致沉降。磁分离后吸取上清时避免触碰磁珠。孵育和洗涤步骤中缓冲液的成分和 pH 应保持一致，以确保结合和洗脱的重现性。储存时避免冷冻，使用前恢复至室温并轻柔混匀。